Glosario
Inmunoensayo tipo sándwich
Formato de ensayo en el que el antígeno queda atrapado entre un anticuerpo de captura, inmovilizado en la superficie, y otro de detección que aporta la señal.
Es el formato dominante en inmunoensayos, tanto en ELISA como en SERS. El nombre describe la geometría: el antígeno queda en medio de dos anticuerpos.
Los pasos
- Captura. Un anticuerpo inmovilizado en la superficie —normalmente por EDC/NHS— retiene al antígeno de la muestra.
- Lavado. Se arrastra todo lo que no se ha unido. Este paso es el que da la especificidad real del ensayo.
- Detección. Un segundo anticuerpo, que reconoce un epítopo distinto del mismo antígeno, se une por el otro lado. Lleva incorporado lo que genera la señal: una enzima en el ELISA, un reportero Raman en SERS.
- Lectura. Se mide la señal del marcador, que es proporcional a la cantidad de antígeno capturado.
Lo que se gana y lo que se pierde
Se gana especificidad. Hacen falta dos reconocimientos independientes para producir señal, así que una unión inespecífica no basta.
Se pierde información estructural. Lo que se lee es el marcador, no el analito. En SERS eso significa que el espectro ya no dice nada sobre el antígeno — a diferencia del formato label-free.
Y se aleja la molécula del metal. El apilamiento anticuerpo–antígeno–anticuerpo mide decenas de nanómetros. Eso anula el mecanismo químico de amplificación y reduce mucho el electromagnético, lo que obliga a que el reportero sea intenso.
Su requisito no negociable
El antígeno debe tener dos epítopos accesibles a la vez. Para moléculas pequeñas es imposible, y hay que recurrir a formatos competitivos.