Glosario
Acoplamiento EDC/NHS
Química estándar para unir covalentemente una proteína a una superficie, formando un enlace amida entre un grupo carboxilo y una amina.
Es la reacción que sujeta el anticuerpo al sustrato en la mayoría de los inmunosensores. Une un grupo carboxilo (–COOH) de la superficie con un grupo amina (–NH₂) de la proteína, formando un enlace amida estable.
Los dos reactivos
- EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) activa el carboxilo y forma un intermedio muy reactivo pero también muy inestable, que se hidroliza en segundos.
- NHS (N-hidroxisuccinimida) captura ese intermedio y lo convierte en un éster activo que aguanta minutos u horas. Ese margen es lo que hace la reacción manejable.
Sin NHS, el rendimiento cae mucho: el intermedio se hidroliza antes de encontrar a la proteína.
Dónde se tuerce en la práctica
- El pH importa dos veces. La activación con EDC/NHS va bien en ácido (pH 5–6); el acoplamiento con la amina necesita pH neutro o ligeramente básico. Son dos pasos con tampones distintos.
- La orientación es aleatoria. Una IgG tiene muchas lisinas accesibles, y el acoplamiento usa la que encuentre. Una fracción de los anticuerpos queda anclada por el sitio de unión al antígeno, es decir, inútil.
- Hay que bloquear después. Los ésteres activos que no reaccionaron capturarían cualquier proteína de la muestra. Se desactivan con etanolamina o se bloquea la superficie con albúmina.
Sobre metal, el carboxilo suele venir de una monocapa autoensamblada de tioles terminados en ácido.